苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的測(cè)定 HPLC法
苯甲酸、山梨酸和糖精鈉是常用飲料及食品等的添加劑。食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定方法有氣相色譜法(GC)、薄層色譜法(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)。GC 法準(zhǔn)確度不夠，分離度不好；TLC 法操作復(fù)雜，僅可半定量分析； HPLC 法可同時(shí)測(cè)定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉。具有方法簡(jiǎn)便，靈敏度高，選擇性好，線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。

(1) 材料與樣品處理

儀器 ：高效液相色譜儀(配紫外檢測(cè)器)。

試劑：1. 甲醇(CH3OH)色譜純；

2. 乙酸銨(NH4Ac) A.R.；

3. 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/mL)；

4. 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/mL)；

5. 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/mL)；

6. 純水。

(2) 色譜條件

色譜柱：Venusil® XBP C18 L 4.6mm×250mm 5μm；

波 長(zhǎng)：230nm；

流動(dòng)相：0.02mol/L 乙酸銨：甲醇=(95+5)；

流 速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：20μL；

柱 溫：30℃。

在上述色譜條件下，注入20μL 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)混合液(0.04、0.02、0.04μg/μL)。色譜圖見(jiàn)圖1


 

(3) 結(jié)果與討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)混合液的配制。吸取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，配制濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10μg/μL 的標(biāo)準(zhǔn)混和液。按上述色譜條件測(cè)定峰面積，并繪制校正曲線。見(jiàn)圖2～4。由圖可見(jiàn)，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉校正曲線的線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù)均大于0.99900)。

 

3.2 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉測(cè)定精密度試驗(yàn)

在上述色譜條件下，連續(xù)六次吸取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)混和液(濃度分別為0.02、0.04、0.04μg/μL)20μL注入色譜儀，分別繪制色譜圖。見(jiàn)圖5。

a) 保留時(shí)間測(cè)定精密度試驗(yàn), 見(jiàn)表1。

b) 峰面積測(cè)定精密度試驗(yàn)，見(jiàn)表2。

由表1～2 可見(jiàn)，苯甲酸、山梨酸和糖精鈉保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)

(4) 訂貨指南

準(zhǔn)偏差(RSD)范圍為0.39～0.74%；峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)范圍為0.66～0.88%。表明儀器系統(tǒng)測(cè)定精密度良好。

3.3 內(nèi)控樣品測(cè)定

用可口可樂(lè)飲料作基質(zhì)，配制含苯甲酸、山梨酸和糖精鈉濃度分別為0.04、0.02、0.04μg/μL 的內(nèi)控樣品。按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行樣品預(yù)處理。在同樣條件下測(cè)定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量。結(jié)果分別為0.0400、0.0198、0.0396μg/μL。

3.4 結(jié)論

高效液相色譜儀及色譜柱 Venusil XBP C18L(4.6mm×250mm，5μm)，測(cè)定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉，具有靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、精密度和線性關(guān)系良好、出峰時(shí)間快、峰形好、分離度好等特點(diǎn)。適用于飲料、食品等中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量的測(cè)定。





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