Sephadex LH-20葡聚糖凝膠
——最適合天然產(chǎn)物的純化,特別是嗜脂性分子純化及制備
Sephadex 葡聚糖凝膠通過表氯醇交聯(lián)多個葡聚糖得到。
葡聚糖是以蔗糖為底物的細菌Leuconsostocmesenteroides的代謝產(chǎn)物，為線性高度聚合碳水化合物的總稱。由于每個葡聚糖單元含有三個羥基，因此葡聚糖易溶于水。要使葡聚糖不溶于水，而成為可以在水中溶漲的凝膠，就必須與雙官能團的表氯醇交聯(lián)。表氯醇的比例越大，交聯(lián)成分越高，膠的溶漲能力就越小，排阻極限就越低，這時的產(chǎn)品為G-10、G-25等。
我們知道G-10、G-25這些葡聚糖凝膠是在水溶液中使用，若要用有機溶劑作為流動相，只有通過羥丙基化將Sephadex G轉(zhuǎn)化為可在有機溶劑中溶漲的葡聚糖凝膠。這時的產(chǎn)品為Sephardex
LH-20.或LH-60。
層析原理:
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凝膠過濾--------依賴于分子的大小和形狀
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吸附層析-----依賴于被分離化合物與凝膠之間的氫鍵數(shù)量和質(zhì)量
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分配層析----------------依賴于被分離化合物在流動相（溶劑）和固定相（凝膠）之間的分配，這主要由樣品的極性和溶劑的極性決定的。
特點:
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適合用有機溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物
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結(jié)合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子
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載量可高達300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變
Sephadex LH-20性質(zhì)
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Sephadex LH-20性質(zhì)和操作
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干膠溶脹表
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排阻極限
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4-5KD(球蛋白)
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溶劑
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溶脹體積(ml凝膠/g干膠粉末)
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上樣量
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取決于所需分辯率
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Dimethyl sulphoxide 二甲亞砜
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4.4-4.6
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尺寸排阻模式
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小于總體積的20%
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Pyridine 嘧啶
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4.2-4.4
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正相分配模式
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小于總體積的1%
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Water 水
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4.0-4.4
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膠粒形狀
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球形,多孔
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Dimethylformamide
二甲基甲酰胺
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3.8-4.2
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顆粒大小(干)
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18-111μm(直徑)
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Saline 生理鹽水
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3.9-4.1
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顆粒大小中間值(干)
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70μm(直徑)
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Methanol 甲醇
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3.8-4.1
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顆粒大小(甲醇)
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27-163μm(直徑)
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Methane dichloride 二氯乙烷
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3.8-4.1
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顆粒大小中間值(甲醇)
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103μm(直徑)
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Chloroform 氯仿
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3.8-4.1
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最大線性流速
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720cm/h
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Proanol 丙醇
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3.7-4.0
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參考線性流速
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60cm/h
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Ethanol 乙醇
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3.6-3.9
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pH的穩(wěn)定性
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Isobutanol異丁醇
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3.6-3.9
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操作過程
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2-11
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Formamide 甲酰胺
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3.6-3.9
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清洗過程
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2-13
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Methylene dichloride 二氯甲烷
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3.6-3.9
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化學穩(wěn)定性
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在許多水溶液中都穩(wěn)定
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Butanol 丁醇
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3.5-3.8
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有機溶劑系統(tǒng)中都穩(wěn)定.
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Isopropanol異丙醇
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3.3-3.6
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高壓滅菌
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Tetrahydrofuran
四氫呋喃
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3.3-3.6
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高壓滅菌
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121 ℃,
20min
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Dioxane 二氧雜環(huán)己烷
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3.2-3.5
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操作溫度
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4℃-40℃
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Acetone丙酮
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2.4-2.6
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保存條件
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Acetonitrile乙腈
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2.2-2.4
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新填料
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4-25℃
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Carbon tetrachloride 四氯化碳
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1.8-2.2
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使用后填料
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4-8℃,
pH6-8, 勿冷凍,
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Benzene 苯
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1.6-2.0
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加入抑菌劑(如20%乙醇,0.04%疊氮鈉)
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Ethyl acetate乙酸乙酯
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1.6-1.8
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Toluene甲苯
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1.5-1.6
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